Антитела к рецепторам эстрогена

Антитела к рецепторам эстрогена

Зависимость опухоли от гормонов

Одним их характерных признаков злокачественных опухолей является их «умение» стимулировать свой рост самостоятельно. Они выделяют факторы роста, которые связываются с рецепторами (белковыми молекулами расположенными в опухоли) после чего происходит стимуляция роста. Стимулирующими факторами могут быть и вещества, находящиеся в организме человека. Так, в случае рака молочной железы такими веществами могут выступать эстрогены — женские половые гормоны.

Более ста лет назад было показано, что удаление яичников, являющихся основным источником эстрогенов у женщин в пременопаузе, оказывает противоопухолевый эффект у больных с распространенным РМЖ.

Рецепторы — чувствительность клеток к гормонам

Тестирование опухоли на ER и PR является обязательным

Как остановить выработку гормонов?

Остановка функции яичников у женщины (хирургическая, лучевая, гормональная) приводит к снижению уровня эстрогенов крови с 1000-100 до 100-10 ммоль/л, т. е. в 10 раз. Остаточный уровень эстрогенов обеспечивается превращением андростендиона, вырабатываемого корой надпочечников, в эстрогены за счет реакции ароматизации, протекающей в жировой и некоторых других тканях.

В постменопаузе главным путем образования эстрогенов является ароматизация андрогенов, продуцируемых надпочечниками. Таким образом, блокада яичников не обеспечивает полной остановки образования этих гормонов, и требуется дополнительное воздействие, чтобы прервать стимуляцию опухоли.

Зачем нужно тестирование на ER?

Спросите вашего врача: Какое значение имеет определение рецепторов к эстрогенам и прогестерону в лечении рака молочной железы?

Определение рецепторов к эстрогену и прогестерону в опухоли молочной железы является на сегодняшний день стандартным мероприятием, позволяющим планировать объем лечение, определять в нем роль гормонотерапии, а также определять риск возникновения рецидива заболевания.

Как проводится определение рецепторов?

Определение рецепторов к эстрогенам и прогестерону проводится с помощью иммуногистохимического исследования. Материалом для исследования обычно являются блоки препарата (кусочек опухоли, специально обработанный и залитый в парафин). Исследование проводится в специальных лабораториях.

Значительный прогресс в лечении рака молочной железы внесли исследования по выявлению и количественному определению в опухолевых клетках стероидных рецепторов к эстрагену и прогестерону. Пациентки, опухоли которых содержали рецепторы к эстрогену и прогестерону, в 50-65% случаев оказались чувствительными к гормональной терапии. В то же время, если опухоль содержала один тип рецептора, чувствительность к гормональной терапии значительно снижалась. В случае если опухолевые клетки не содержали рецепторов, то эффективность гормонотерапии не превышала 10%.

В настоящее время общепринято, что если более 10% опухолевых клеток содержат рецепторы к эстрогену или прогестерону, то опухоль следует считать гормоночувствительной. В Израиле гормональные препараты применяются на различных этапах комбинированного и комплексного методов лечения операбельных форм рака молочной железы, а также в случаях генерализации опухолевого процесса.

Следует признать, что первичная опухоль молочной железы состоит из биологически различных популяций клеток. Они различаются по многим параметрам, в частности по скорости роста, кариотипу, наличию или отсутствию гормональных рецепторов, продукции опухоль-ассоциированных белков, иммуногенности, чувствительности к гормоно- и химиотерапии.

Эффективной последующей антиэстрогенной стратегией явилась блокада рецепторов этих гормонов. С этой целью были синтезированы селективные модуляторы рецепторов к эстрогенам (SERM) тамоксифен и торимефен. Назначение тамоксифена в течение пяти лет у пациенток с рецептор-позитивными опухолями в менопаузе позволило сократить частоту рецидивов и возникновения рака контралатеральной молочной железы на 50%, уменьшить смертность на 28%.

Помимо этих препаратов есть и новые, не упомянутые в статье, созданные по тому же принципу — блокировке рецепторов опухоли к гормонам женщины или же подавлению функции яичников. Спросите у нашего консультирующего врача о новых направлениях лечения гормоно-зависимых опухолей груди и какие успехт уже достигнуты в лечении не чувствительных к гормонам опухолей. Мы можем помочь вам — не тяните время, оно не ждет.

Читайте также:  Аманда лир фото до и после

Оценка экспрессии гормонального рецептора является частью рутинного обследования каждого рака молочной железы. В этом исследовании сообщается о характеристике нового моноклонального антитела кролика, клона EP1, направленного против рецептора эстрогена (ER) α. Кроме того, его иммуногистохимические характеристики в архивных тканях оцениваются в нормальных тканях и двух различных когортах пациентов с раком молочной железы.

Описаны сравнительный анализ между EP1 и компонентом анти-ERα набора ERD / PR pharmDx (коктейль клонов мышиного моноклонального антитела 1D5 и ER-2-123) и между EP1 и другим коммерчески доступным моноклональным антителом кролика SP1.

Клон EP1 специфически обнаруживает ядерный ER во всех исследованных тканях; цитоплазматическое окрашивание не наблюдалось. Анализ показывает высокую степень согласования (

95%) между EP1 и компонентом ERα набора Dako ER / PR pharmDx и клона Ventana SP1. Однако использование антитела EP1 вместе с системой обнаружения Dako EnVision FLEX приводило к более сильной интенсивности окрашивания по сравнению с антителом SP1 с использованием системы детектирования ультрафиолета DAB Ventana, что привело к лучшей «простоте использования».

Использование EPI может привести к лучшей интерпретации результатов анализа ER.

Рецептор эстрогена (ER) является регулятором нормального развития и функции молочной железы. Он также играет важную роль в развитии и прогрессировании рака молочной железы, причем примерно 80% инвазивных форм рака молочной железы выражают ER. В клинических условиях было показано, что ER-положительные пациенты с метастатическим и неметастатическим заболеванием реагируют на гормональные терапии.1-5

Поскольку статус ER является критически важной переменной для прогнозирования реакции на гормональную терапию, большое внимание уделяется лабораторным методам, которые используются для оценки экспрессии ER. Иммуногистохимия (IHC) была общепринятой методикой обнаружения ER в формалин-фиксированных, парафиновых (FFPE) тканях образцов рака молочной железы за последние несколько десятилетий. Этот метод является предпочтительным патологоанатомами, поскольку он также позволяет одновременную оценку морфологических характеристик.6
7 При общем применении этого метода особое внимание уделяется выявлению новых антител к ЕР для использования в IHC с соответствующей чувствительностью и специфичностью и подтверждается клинической и технической проверкой их эффективности. Эти усилия привели к стандартизации этих анализов ИВК ER и разработке конкретных руководящих принципов их использования и устного перевода.8-11

В последние годы был достигнут ряд существенных улучшений в методах МГП. К ним относятся внедрение методов обнаружения на основе полимера, которые улучшают качество окрашивания за счет уменьшения неспецифического связывания эндогенного биотина и повышенной чувствительности.12 В то же время успехи в образовании и продуцировании первичных антител привели к замене кроличьих поликлональных антител моноклональными моноклональными антителами и, в последнее время, моноклональными антителами кроликов.13 В течение последних нескольких лет использование моноклональных антител кроликов в анализах ER IHC было реализовано с целью постоянного улучшения качества анализа путем введения новых высокочувствительных , конкретные и надежные реагенты. Эти постоянные усилия привели к тщательной оценке нового моноклонального антитела кролика, клона EP1.

В этом исследовании мы описываем характеристику этого антитела и демонстрируем его полезность при обнаружении ERα в образцах тканей рака молочной железы. Характеристики эффективности этого кроличьего антитела сравнивали с компонентом анти-ERα набора ER / PR pharmDx (Dako) (коктейль клонов мышиного моноклонального антитела 1D5 и ER-2-123) и с другим коммерчески доступным моноклональным антителом кролика к ERα , клон SP1 (Ventana).

Читайте также:  Instagram com samburskaya

Чтобы идентифицировать эпитоп человеческого ERα, к которому был присоединен анти-ERα моноклонального кролика, клон EP1 связывается, было синтезировано большое количество перекрывающихся 15-мерных пептидов, охватывающих аминокислотную последовательность, соответствующую 1-300 белка человека (UniProt ID : P03372), который равен фрагменту рекомбинантного белка, используемому для генерирования клона EP1. Связывание антитела с каждым линейным пептидом тестировалось на ELISA на основе PEPSCAN. Короче говоря, 455-луночная мини-пептидная карта, содержащая ковалентно связанные пептиды, инкубировали с ERα-антителом, клоном EP1 (1 мкг / мл). После промывания лунки инкубировали с пероксидазой-конъюгированным антирабитным антителом при разведении 1/1000 в течение 1 ч при 25 ° С. Затем лунки многократно промывали и добавляли пероксидазный субстрат. Через 1 ч развитие цвета ELISA определяли количественно с помощью камеры с зарядовой связью и системы обработки изображений.

Предварительную обработку тканей и окрашивание IHC проводили с использованием протоколов, реагентов и измерительных платформ, показанных в таблице 1.

Протоколы, реагенты и приборы, используемые в анализе

ER, рецептор эстрогена.

Образцы для исследований были закуплены и использованы, как показано в таблице 2. Некоторые образцы тканей из банка тканей Дако были предоставлены Кооперативной сетью для тканей человека, которая финансируется Национальным институтом рака. Для проведения теста соответствия между EP1 и ER компонентом набора pharmDx использовали ER положительные и отрицательные образцы. Для сравнительного анализа между EP1 и SP1 использовали два разных набора микрочипов ткани (TMA). Первый набор состоял из 200 случаев ER + с известными коэффициентами повторения Oncotype DX, а второй набор был сформирован из большой серии случаев (n = 400) с известными долгосрочными результатами. Для генерации TMA использовалось множество ядер 1 мм. Последний ТМА был получен от пациентов, получавших адъювантную гормональную и химиотерапию.

Детали образцов, использованных в исследовании, и источник, откуда они были получены

ER, рецептор эстрогена; FFPE, с фиксированным формалином, с парафином.

Данные, полученные для аналитического исследования специфичности 30 нормальных типов тканей, включали тип клеток, интенсивность окрашивания (шкала 0-3), процент положительно окрашенных клеток и окрашивание (ядерная, цитоплазматическая или мембранная).

Для оценки результатов EP1 и компонента ERα в исследовании соответствия ER / PR pharmDx Kit регистрировали интенсивность окрашивания ядер и долю положительных опухолевых клеток и объединяли для составления диагностического показателя (оценка Allred) для результатов ER pharmDx. Обрезание для положительности было проведено по шкале Allred для ER pharmDx и 1% для EP1.8
15

Для сравнительного анализа между клонами EP1 и SP1 использовались системы Allred и H-score. ТМА были проанализированы вслепую двумя патологами, использующими обрезание ASCO / CAP 1% для положительности, а различия в оценках были разрешены консенсусом, достигнутым путем одновременного просмотра с использованием двуглавого микроскопа.

Программа диаграммной колодки использовалась для выполнения анализа χ2-теста, чтобы наблюдать корреляции между различными параметрами. Кроме того, был проведен парный t-тест для анализа корреляций между H-оценками экспрессии SP1 и EP1. κ-анализ был проведен для оценки степени согласия между двумя реагентами.

Предполагаемый эпитоп человеческого ERα, который распознается клоном EP1, идентифицировали путем оценки связывания антитела с серией перекрывающихся 15-мерных пептидов, которые охватывали аминокислотную последовательность человеческого белка. Как показано на рисунке 1, результаты этих исследований картирования эпитопов ясно показывают, что моноклональное антитело кролика к ERα, клон EP1 распознает аминокислотную последовательность RPLGEV, которая соответствует аминокислотным остаткам 37-42 человеческого ERα (рисунок 1). Эта линейная последовательность уникальна для α-формы белка ER и расположена в неструктурированном N-концевом домене A / B (AF1).

Читайте также:  450 Грамм сколько килограмм

Резюме результатов картирования эпитопа, рецептора антиэстрогена, клона EP1.

Специфичность клона EP1 оценивали путем изучения картины иммунореактивности на наборе из 90 (89 анализируемых) образцов FFPE с нормальной тканью, состоящих из трех пациентов из 30 разных типов тканей. При тестировании с этими нормальными тканями EP1 продемонстрировал положительную активность только в тканях, которые, как известно, экспрессируют ERα. К ним относятся эпителиальные клетки и / или стромальные клетки из груди, шейки матки, пищевода, яичника, предстательной железы, миндалин и матки.

Как рекомендовано в текущих рекомендациях ASCO / CAP, было проведено согласованное исследование для сравнения моноклонального кроличьего анти-ERα, клона EP1 с компонентом анти-ERα клинически подтвержденного набора ER / PR pharmDx в качестве предикатного устройства. Как показано в таблице 3 и на рисунке 2, результаты окрашивания, полученные на образцах карциномы молочной железы с помощью клона EP1, оказались очень совместимыми с результатами, полученными компонентом ERα набора ER / PR pharmDx. Среди 314 случаев, проанализированных (таблица 3), было обнаружено, что 183 случая были положительными при анализе антител, и 119 случаев были признаны отрицательными. Было 10 случаев, которые были оценены как отрицательные с комплектом ERα pharmDx, но положительным с клоном EP1. Два случая были оценены как положительные с предикатным тестом, но отрицательные с клоном EP1. Значения для положительного, отрицательного и общего процентного соглашения составили 98,9%, 92,2% и 96,2% соответственно.

Согласование клона EP1 и компонента ERα набора ER / PR pharmDx

ER, рецептор эстрогена.

Сравнение моноклонального антитела кроликов EP1 с компонентом мышиного моноклонального эстрогенного α (ERα) набора ER / PR pharmDx. На этих панелях демонстрируются согласованные изображения из случаев, показывающих низкую и высокую экспрессию pharmDx и EP1.

После демонстрации соответствия с ER / PR pharmDx Kit клон EP1 также тестировали на двух разных ТМА, содержащих ткани рака молочной железы (Oncotype DX TMA и TMA с долгосрочным наблюдением), а результаты окрашивания IHC сравнивали с те, которые производятся кроличьим моноклональным анти-ERα, клоном SP1 (рисунок 3).

Сравнение клона EP1, выполненного с использованием реактивов Dako и наборов с SP1 с использованием реагентов и наборов Ventana BenchMark. В этих панелях показаны типичные изображения SP1 и выраженная экспрессия EP1 в опухолях молочной железы.

Estrogen Receptor (SP1)

Ссылка на основную публикацию
Анжелина джоли похудела
Актриса потеряла несколько килограммов из-за тяжелого развода и продолжает терять вес Анджелина Джоли, самая красивая женщина мира по версии почти...
Аманда лир фото до и после
-Цитатник Я о любви спою. Художник Грант Сукиасян За счастье просто жить Я принимаю данность. ஐ♥Ты так изысканна. Giuseppe Armani♥ஐ...
Американо с сиропом калорийность
Ты мужественно отказалась от пирожных и хлеба, но перед запахом свежесваренного кофе с утра устоять не можешь? Давай выясним, сколько...
Анимал пак для суставов и связок
Animal Flex от Universal Animal Flex разработан, чтобы сделать ваши суставы и связки более крепкими и чтобы защитить их от...
Adblock detector